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【羧基-瓊脂糖凝膠 4B參數(shù)說明】
中文名：羧基-瓊脂糖凝膠 4B
英文名： ECH Sepharose 4B
供應(yīng)商：上海遠(yuǎn)慕
基質(zhì)：4%瓊脂糖凝膠
耦合基團(tuán)：氨基
顆粒大小：90μm
zui大流速：75cm/h
工作pH：3-14
操作溫度：室溫
保存條件：貯存于4°C-8°C(保存溶液為20%乙醇)
【羧基-瓊脂糖凝膠 4B】使用方法
【羧基-瓊脂糖凝膠 4B簡(jiǎn)介說明】
羧基-瓊脂糖凝膠4B是用由環(huán)氧樹脂耦合方法將6-氨基已酸共價(jià)鍵偶聯(lián)到瓊脂糖4B上；羧基-瓊脂糖凝膠4B含有一個(gè)10個(gè)碳原子連接臂自由羧基，耦合氨基基團(tuán)的配體；長(zhǎng)長(zhǎng)的間隔臂使它特別適合固定的小分子。
【羧基-瓊脂糖凝膠 4B使用方法】
1、乙醇浸泡：在室溫下，將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時(shí)，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干;
2、無鹽水浸泡：室溫下，在無鹽水中充分溶脹24小時(shí)，間隙攪拌，以保證凝膠的*溶脹，然后;
3、鹽酸浸泡：在常溫下再用0.2NHCl浸泡12小時(shí)，間隙攪拌，濾干，水洗只中性;
4、將溶脹好的凝膠脫氣后(真空抽濾或超聲波)根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi)，注意保持濕態(tài)裝柱，并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層;
5、上樣前平衡層析柱至少3-5個(gè)柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);
6、凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調(diào)整;脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關(guān)，柱高控制在40-50cm以下，過高的凝膠層會(huì)引起較大的反壓，應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制，脫鹽時(shí)高徑比為5：1即可;
7、洗脫方法：可以用無鹽水，也可以采用上柱時(shí)的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化;
8、在位清洗(CIP)凝膠使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個(gè)柱體積，再以至少三個(gè)柱體積平衡緩沖液再生。
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