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DEAE 纖維素 DE-32使用說明書
DEAE 纖維素 DE-32簡介說明
DEAE-纖維素，它采用平均粒徑為50µm的顆粒型親水高分子聚合物，表面又用大分子糖鏈接枝，使它有更高的比表面積和更好的生物兼容性，保持更高載量，同時又具有更好的分辨率。由于比表面積大，平衡和洗脫的時間也更短。它經(jīng)過接枝即使是純化病毒，質(zhì)粒等超大分子的物質(zhì)，載量基本保持不變。
DEAE 纖維素 DE-32處理方法
1、先將干粉的纖維素浸泡在蒸餾水中，一段時間大約1小時左右，去除雜質(zhì)，抽干一下。
2、再用0.1mol/l的醋酸溶液浸泡2小時，用去離子水洗凈至PH中性，并抽干。
3、將抽干的纖維素再浸泡在0.1mol/l的NaOH溶液中2小時，用去離子水洗至中性，抽干。即可用了。
DEAE 纖維素 DE-32操作步驟
1、色譜柱裝填
a、所需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體做脫氣處理。填料可直接稱量需要的量用緩沖液溶漲一小時裝柱即可，如果不好溶脹，可適當(dāng)加熱。
b、在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空氣，關(guān)閉柱子出口，在柱內(nèi)保留少量的20%乙醇。20%乙醇容易產(chǎn)生氣泡，可以在里面加1%吐溫避免氣泡產(chǎn)生。也可以換成純水裝柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也換成純水，具體的方法取需要體積的填料在抽濾漏斗上進(jìn)行，也可以小心傾去填料上的20%乙醇，再換成5倍體積的純水，反復(fù)沉淀去上清，5次左右就可以用于裝柱子。
c、此填料顆粒比較細(xì)，所以一定要注意柱子要選擇合適的篩網(wǎng)，不能漏，也可以取點(diǎn)填料加到篩網(wǎng)上試試，如果沒有問題再將填料連續(xù)倒入柱子時，要用玻璃棒的緊靠柱子內(nèi)壁引流，以減少氣泡的產(chǎn)生，讓填料先自然沉降到填料體積不再變化，而填料和上面的液體很好分層，上層溶液*澄清，就可以開泵用適當(dāng)?shù)牧魉賶褐?，填料體積不再變化后，再把轉(zhuǎn)換頭緊頂在填料上就可以平衡柱子使用。使用的流速要小于裝柱子的流速。
d、在裝柱子前，填料從冰箱中取出至少要室溫放置2-3個小時，這樣避免裝柱子時由于溫度變化而使柱子中產(chǎn)生氣泡。
2、蛋白的結(jié)合
樣品的鹽濃度和pH要盡量和平衡柱子的緩沖液一致，鹽濃度過高或者pH帶低也許掛不上，所以要根據(jù)自己的樣品做適當(dāng)調(diào)整。
3、蛋白的洗脫
這個填料如果采用線性梯度洗脫，柱子的直徑和高度比是大于10，數(shù)值越大越有利于分離，而且樣品別上太多，可以按約10mg/ml上樣，如果采用階段洗脫的方法，裝短粗柱子就可以，上樣量也沒有限制。階段洗脫容易放大，重復(fù)性好，如果洗脫條件好*可以得到和線性梯度一樣或者更好。采用什么方法*根據(jù)自己需要。
4、再生清洗
a、用完之后用0.1M醋酸洗5個柱體積，然后用2MNaCl洗5個床體積，再用水洗至中性，然后用20%乙醇保存。
b、有機(jī)溶劑和水混合很容易產(chǎn)生氣泡，為了避免這樣情況，可以把配好的有機(jī)溶劑在室溫放置過夜，再使用，這樣可以避免氣泡進(jìn)柱子而導(dǎo)致柱子不能正常使用。
DEAE 纖維素 DE-32注意事項
上樣之前，樣品至少用0.45微米膜過濾，盡量去除色素，否則色素會被吸附到填料上，影響填料的正常使用。
在使用過程中，不能使用強(qiáng)酸強(qiáng)堿，酸和堿的濃度應(yīng)低于0.15摩爾。
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