上海遠(yuǎn)慕生物講述人5核苷酸酶(5-NT)ELISA試劑盒檢測說明及其他咨訊，本司現(xiàn)貨供應(yīng)不同種屬ELISA試劑盒，提供免費(fèi)代測服務(wù)，種屬有大鼠，小鼠，人，馬，猴，魚，羊，雞，兔，豬，狗，植物，牛，豚鼠及其他種屬等，品種齊全，價格實惠，歡迎訂購！
人5核苷酸酶(5-NT)ELISA試劑盒檢測說明
【信息說明】
中文名：人5核苷酸酶(5-NT)ELISA試劑盒
別名：人5核苷酸酶(5-NT)ELISA Kit
供應(yīng)商：上海遠(yuǎn)慕
規(guī)格：48T/96T
保存溫度：2-8℃低溫保存
有效期：6個月
試劑盒成分：酶標(biāo)板，試劑，標(biāo)準(zhǔn)品等。
檢測原理：狗膽囊收縮素(CCK)ELISA試劑盒采用雙抗體夾心ABC-ELISA法
用途：用于測定血清，血漿及相關(guān)液體樣本中相關(guān)含量或活性。
特點：敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便。
實驗方法： 酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。
【成分配制】
1、預(yù)包被板: 96T/48T
2、酶標(biāo)記抗體: (30倍濃縮)HRPIgG,親合純化 0.4mL x 1
3、標(biāo)準(zhǔn)品: -6 0.5mL x 2
4、EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1
5、標(biāo)記抗體稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1
6、顯色劑: TMB底物液 15mL x 1
7、終止液: 1N 12mL x 1
8、濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1
【樣本處理】
包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
1、血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
2、血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
3、尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4、細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/ 分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并 放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5、組織標(biāo)本：
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
【操作步驟】
1、編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)。
2、加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4、配液：將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用。
5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7、顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘。
8、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
9、測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)；測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
【注意事項】
1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4、請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6、底物請避光保存。
7、嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9、本試劑不同批號組分不得混用。
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