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動物血清的使用指南,你知道嗎
點擊次數(shù):1196 更新時間:2018-05-14
  動物血清的使用指南,你知道嗎?
  血清在細(xì)胞培養(yǎng)中為細(xì)胞提供氨基酸,蛋白質(zhì),維生素(特別是脂溶性維生素如A,D,E,K),碳水化合物,脂肪,激素,生長因子,礦物質(zhì)及微量元素。此外,血清還可以緩沖培養(yǎng)基,抑制蛋白水解酶,增加培養(yǎng)基的粘度,降低在移液或攪拌時造成的剪切力。
  對于動物血清的正確使用,這里做一個簡單的說明。
  1、儲存
  血清的保質(zhì)期是5年,儲存溫度-10 ~ -30℃。
  血清長時間儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,長期保存血清必須在-10℃以下儲存,并避免反復(fù)凍融。
  2、解凍
  將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。
  如果在37℃或更高的溫度解凍血清,血清中會出現(xiàn)沉淀。此沉淀可能包括磷酸鈣結(jié)晶,但不改變血清的性能,同樣血清熱滅活也會導(dǎo)致沉淀的形成。
  3、渾濁和沉淀
  所有的血清可能保留一些纖維蛋白原。某些外部因素可能引發(fā)纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白,導(dǎo)致血清解凍后可能會觀察到絮狀物或混濁。這些物質(zhì)的存在不會改變血清的性能。
  如果想去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝到無菌離心管中,以低速離心1~2min,上清液即可直接加入到培養(yǎng)基內(nèi)使用。
  注意:不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物,因為這可能阻塞濾膜。
  4、熱滅活處理
  通常不使用熱滅活血清,除非某些特定的細(xì)胞系特別需要。熱滅活會降低或破壞血清中的生長因子,影響某些細(xì)胞的生長。
  熱滅活zui初是為了滅活補體及支原體。目前,如果血清中出現(xiàn)支原體,可以通過過濾去除;而去除補體通常是不必要的,除非是在準(zhǔn)備或檢測病毒或細(xì)胞毒性試驗時。有研究顯示,血清37℃孵育就可以滅活血清中熱不穩(wěn)定的補體成分,只有很少一部分細(xì)胞在這種滅活血清中生長得更好,如胚胎干細(xì)胞和許多昆蟲細(xì)胞。
  1)按正確操作解凍血清,恢復(fù)室溫。
  2)水浴56℃提前預(yù)熱。
  3)將準(zhǔn)備好的血清和裝有相同體積水的燒杯同時放入水浴鍋,當(dāng)燒杯中的溫度計指示達(dá)到56℃時開始計時,滅活30min后結(jié)束,整個過程中需要隨時搖晃混勻。
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