上海遠(yuǎn)慕生物提供人羅丹納(ryr)ELISA試劑盒檢測說明書，本司提供ELISA試劑盒免費(fèi)代測服務(wù)，種屬有：大鼠ELISA試劑盒，人ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒，狗ELISA試劑盒，豬ELISA試劑盒，雞ELISA試劑盒，猴ELISA試劑盒，植物ELISA試劑盒，豚鼠ELISA試劑盒，更多種屬請來電！
人羅丹納(ryr)ELISA試劑盒檢測說明書
【信息說明】
中文名：人羅丹納(ryr)ELISA試劑盒
別名：人羅丹納(ryr)ELISA Kit
供應(yīng)商：上海遠(yuǎn)慕
規(guī)格：48t/96t
保存：2~8℃
有效期：6個月
樣本：血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
特點(diǎn)：敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便。
用途：用于測定血清，血漿及相關(guān)液體樣本中相關(guān)含量或活性。
種屬：人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。
檢測原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。
【樣本處理】
1、血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2、血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3、尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4、細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5、組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7、不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
【試劑配制】
1、酶聯(lián)板(Assay plate )：一塊(96孔)。
2、標(biāo)準(zhǔn)品(Standard)：2瓶(凍干品)。
3、樣品稀釋液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent)：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent)：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody)：1×120μl/瓶(1：100)
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin)：1×120μl/瓶(1：100)
8、底物溶液(TMB Substrate)：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液(Wash Buffer)：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液(Stop Solution)：1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
【操作步驟】
1、待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。
2、酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
3、洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后，即甩去)，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
4、陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
5、酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
6、洗板，同(4)。
7、每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
8、酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
9、洗板，同(4)。
10、每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
11、每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
12、分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，zui終測得的OD值為兩者之差(W1-W2)，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
13、數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
【注意事項】
1、實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
2、試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
3、使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
4、不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
5、洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
6、使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
7、加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
8、按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
9、底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
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