上海遠(yuǎn)慕生物詳細(xì)講述人胎兒纖連蛋白(fFN)ELISA試劑盒操作步驟及其他咨訊，本司現(xiàn)貨供應(yīng)ELISA試劑盒，動(dòng)物血清，標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)照品，培養(yǎng)基，抗原，抗體，實(shí)驗(yàn)耗材，染色液，溶液，緩沖液，生化試劑，化學(xué)試劑及其他試劑，歡迎訂購(gòu)！
人胎兒纖連蛋白(fFN)ELISA試劑盒操作步驟
【信息說(shuō)明】
中文名：人胎兒纖連蛋白(fFN)ELISA試劑盒
別名：人胎兒纖連蛋白(fFN)ELISA Kit
供應(yīng)商：上海遠(yuǎn)慕
規(guī)格：48t/96t
保存：2-8℃
有效期：6個(gè)月
檢測(cè)原理：狗膽囊收縮素(CCK)ELISA試劑盒采用雙抗體夾心ABC-ELISA法
用途：用于測(cè)定血清，血漿及相關(guān)液體樣本中相關(guān)含量或活性。
特點(diǎn)：敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便。
預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測(cè)定人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中IL-38含量。
檢測(cè)目的:用于測(cè)定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本，例如適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。但ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常見(jiàn)到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。
【樣本保存】
1、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2、血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3、細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5、保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
【操作步驟】
1、待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。
2、酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。
3、洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后，即甩去)，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
4、陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
5、酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
6、洗板，同(4)。
7、每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
8、酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
9、洗板，同(4)。
10、每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
11、每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
12、分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，zui終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2)，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
13、數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
【注意事項(xiàng)】
1、用戶在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
2、每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。
3、為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。
4、未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請(qǐng)于2-8℃保存。標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體工作液、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用。請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體工作液或、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液。
5、建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
【相關(guān)推薦】
