培養(yǎng)基制備規(guī)程

1.目的
規(guī)范本中心微生物實驗室培養(yǎng)基制備工作，保證培養(yǎng)基的質量。

2.適用范圍
本規(guī)程適用于使用商品化干粉培養(yǎng)基制備各種待用培養(yǎng)基。

3.職責
3.1 培養(yǎng)基制備人員負責按本規(guī)程制備各類培養(yǎng)基，及時填寫成品培養(yǎng)基制備記錄，編制培養(yǎng)基目錄，粘貼標簽。
3.2 科室負責人：負責指導、監(jiān)督檢驗人員按規(guī)程制備培養(yǎng)基。

4.制備程序

4.1 概述
4.1.1 制備培養(yǎng)基所用的化學藥品，均為化學純。有些試劑在使用前應先試用。
4.1.2 使用脫水培養(yǎng)基和其他含有有害物質（如膽鹽或其他選擇劑）的成分時，應遵循良好實驗室規(guī)范和生產廠商提供的使用說明。
4.1.3 使用商品化脫水合成培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基時，應嚴格按照廠商提供的使用說明配制。如質量/體積、PH、制備條件、滅菌條件和操作步驟等。
4.1.4 使用各別成分制備培養(yǎng)基時，應按配方準確配制，并記錄所使用成分的特性。
4.1.5 制備培養(yǎng)基常用的容器為玻璃、不銹鋼鋁、鍋或搪瓷容器。不宜使用銅或鐵鍋。培養(yǎng)基中的含銅量過高時（＞0.3mg/1000ml），細菌不易生長；含鐵量過高時（＞0.14mg/1000ml），則妨礙細菌毒素的產生。

4.2 水
4.2.1 制備培養(yǎng)基應使用蒸餾水或相同質量的水，以排除測試條件下抑制或影響微生物生長的物質。電阻率在25℃時應≥300000Ω·cm。最好每周檢測一次。
4.2.2 制備培養(yǎng)基時避免采用離子交換器生產的去離子水，其微生物含量可能較高，這種水在過濾滅菌后仍可能帶有細菌生長的抑制因子。

4.3 稱量和復水
4.3.1 稱量所需量的脫水培養(yǎng)基（注意緩慢操作，必要時佩戴口罩或在通風柜中操作，以防吸入含有有毒物質的培養(yǎng)基粉末），先加入少量的水，充分混合（注意避免培養(yǎng)基結塊），然后再加水至所需的量。
4.3.2 必須選擇合適的天平和量筒，以確保稱量和移液的準確性。

4.4 溶解和分裝
脫水培養(yǎng)基加水后應適當加熱，并不停攪拌使其快速溶解，必要時，重新溶解。含瓊脂的培養(yǎng)基在加熱前應先浸泡幾分鐘。用各別成分制備的培養(yǎng)基應將不同成分分別加入適量的水中，并充分溶解，然后再加水至所需的量。

4.5  測定和調整PH
4.5.1 用PH計或精密PH紙測pH，必要時進行調整。
4.5.2 在實驗室用各別成分制備的培養(yǎng)基，除特殊說明外，培養(yǎng)基滅菌后冷卻至25℃時，PH的變化不應超過0.2個單位。
4.5.3 一般使用濃度約為40g/L(約1mol/L)的氫氧化鈉溶液或濃度約為36.5g/L(約1mol/L)的鹽酸溶液調整培養(yǎng)基的pH。

4.6 分裝
將配制好的培養(yǎng)基根據使用要求分裝到適當的容器中，并及時密封好。

4.7 滅菌
4.7.1分裝好的培養(yǎng)基應當天進行滅菌處理（2小時內滅菌最佳）。
4.7.2實驗室采用濕熱滅菌對培養(yǎng)基進行滅菌處理，按照培養(yǎng)基使用說明采用合適的滅菌溫度和時間。

4.8 保存
制就的培養(yǎng)基不宜保存過長，以少量勤做為宜。培養(yǎng)基存放于暗處和（或）4℃～12℃冰箱的密封袋或平皿筒中可延長貯存期限。

4.9 制備記錄
培養(yǎng)基制備完畢后，應及時填寫“成品培養(yǎng)基制備記錄"和“成品培養(yǎng)基目錄清單"，并在外包裝上貼好相應的標簽，標明名稱，編號，制備日期和有效期等內容。