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    中文名：人1,3-βD（1,3-βDglucosidase）葡葡糖苷酶ELISA試劑盒

    別名：人1,3-βD（1,3-βDglucosidase）葡葡糖苷酶ELISA Kit

    供貨商：上海遠(yuǎn)慕

    產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T

    預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測定血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中的含量。

    引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有：①標(biāo)本因素；②試劑因素；③操作因素

    特點：靈敏性高、特異性強、重復(fù)性好

    待檢樣本：體液、血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿等

    用途：僅用于科研，不可應(yīng)用于臨床

    ELISA試劑盒包含以下各組分：

    （1）結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；

    （2）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；

    （3）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）；

    （4）酶的底物；

    （5）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），ELISA試劑盒參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測定中）；

    （6）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；

    試劑盒特性

    ◎靈敏度：有二層含義，1）為試劑檢出被檢物質(zhì)的zui低量的能力；2）為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力。

    ◎特異性：常用交叉反應(yīng)率表示。含有與待測物相近結(jié)構(gòu)部份的物質(zhì)可能存在交叉反應(yīng)，使測定結(jié)果升高，可能導(dǎo)致假陽性，所以交叉反應(yīng)是評價其質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)。

    ◎精密度：ELISA試劑一般指其批內(nèi)CV%，其值應(yīng)小于15%；定量試劑應(yīng)同時考察線性范圍。

    ◎準(zhǔn)確度：通過添加回收實驗進(jìn)行評價。

    ◎簡便性：指在不影響試劑的前三項指標(biāo)的前題下，實驗和測定步驟越少越好，在定性實驗中結(jié)果判斷簡單明了，定量試驗結(jié)果計算也應(yīng)簡單。

    ◎安全性：指試劑對操作者和環(huán)境安全無害無傳染性。

    ◎經(jīng)濟(jì)性：試劑在同等質(zhì)量條件下通過大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進(jìn)步降低成本，而市場價格比較合理。

    ◎試劑評價：需要有的確證方法和確證的樣品進(jìn)行檢測。

    人1,3-βD（1,3-βDglucosidase）葡葡糖苷酶ELISA試劑盒免費代測實驗原理

    用純化的人的1,3-βD葡葡糖苷酶（1,3-βD glucosidase）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入1,3-βD葡葡糖苷酶（1,3-βD glucosidase），再與HRP標(biāo)記的1,3-βD葡葡糖苷酶（1,3-βD glucosidase）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的1,3-βD葡葡糖苷酶（1,3-βD glucosidase）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人1,3-βD葡葡糖苷酶（1,3-βD glucosidase）濃度。

    人1,3-βD（1,3-βDglucosidase）葡葡糖苷酶ELISA試劑盒免費代測操作步驟：

    實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

    1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。

    為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

    2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制），37℃，60分鐘。

    3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

    4. 每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物素標(biāo)記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。

    5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

    6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

    7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

    8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測。

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